Ένα κοινό ζεύγος φθοροφόρων για βιολογική χρήση είναι ένα ζεύγος κυανών φθορίζουσας πρωτεΐνης( CFP) - κίτρινου φθορισμού πρωτεΐνης( YFP). Και οι δύο είναι παραλλαγές χρώματος πράσινης φθορίζουσας πρωτεΐνης( GFP). Η επισήμανση με οργανικές χρωστικές φθορισμού απαιτεί καθαρισμό, χημική τροποποίηση και ενδοκυτταρική ένεση πρωτεΐνης ξενιστή. GFP παραλλαγές μπορούν να συνδεθούν με μια πρωτεΐνη ξενιστή με γενετική μηχανική που μπορεί να είναι πιο βολική. Παρομοίως, μια σύντηξη των CFP 2Α2 και YFP 2Α2 (παράλληλο διμερές) που συνδέεται με μια συνένωση διάσπασης πρωτεάσης μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως προσδιορισμός διάσπασης.
BRET
Ένας περιορισμός του FRET που εκτελείται με δότες φθοροφόρου είναι η απαίτηση για εξωτερικό φωτισμό να ξεκινήσει η μεταφορά φθορισμού, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε θόρυβο υποβάθρου στα αποτελέσματα από την άμεση διέγερση του αποδέκτη ή στο photobleaching. Για να αποφευχθεί αυτό το μειονέκτημα, έχει αναπτυχθεί μεταφορά ενέργειας συντονισμού βιοφωταύγειας (ή BRET). Αυτή η τεχνική χρησιμοποιεί μια βιοφωταύγεια λουσιφεράση (συνήθως η λουσιφεράση από τη Renilla reniformis) αντί για CFP για να παράγει μια αρχική εκπομπή φωτονίων συμβατή με το YFP .
Εικόνα 080A | Διάγραμμα κινουμένων σχεδίων της έννοιας της μεταφοράς ενέργειας συντονισμού Förster( FRET). | Curtis Neveu (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Concept_of_FRET.png), "Concept of FRET", https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/legalcode από το Wikimedia Commons
Συγγραφέας : Yavor Mendel
Σχόλια
Δημοσίευση σχολίου