αφού επιλεγεί επιτυχώς η μεταγωγή κυττάρων, απαιτείται απομόνωση μεμονωμένων κυττάρων για τη διεξαγωγή scRNA-seq. Perturb-seq και CROP-seq έχουν πραγματοποιηθεί χρησιμοποιώντας τεχνολογία που βασίζεται σε σταγονίδια για απομόνωση μεμονωμένων κυττάρων, από την άλλη πλευρά η στενά συγγενής CRISP-seq πραγματοποιήθηκε με κλήρωση που βασίζεται σε μικροβυθίσματα. Μόλις τα κύτταρα απομονωθούν σε επίπεδο απλού κυττάρου, πραγματοποιείται αντίστροφη αντιγραφή, ενίσχυση και αλληλουχία για την παραγωγή γονιδιακής μορφής προφίλ έκφρασης για κάθε κύτταρο. Πολλές προσεγγίσεις scRNA-seq ενσωματώνουν μοναδικά μοριακά αναγνωριστικά (UMIs) και γραμμωτούς κώδικες κατά τη διάρκεια του βήματος αντίστροφης αντιγραφής για ευρετηρίαση μεμονωμένου RNA μόρια και κύτταρα, αντίστοιχα. Αυτοί οι πρόσθετοι γραμμικοί κώδικες χρησιμεύουν για να βοηθήσουν στην ποσοτικοποίηση των μεταγραφών RNA και για να συσχετίσουν καθεμία από τις ακολουθίες με το κελί προέλευσής τους.
Εικόνα 240Α | Επισκόπηση της ροής εργασίας Perturb-seq | Sdlee94 / Attribution-Share Alike 4.0 International | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Overview_of_Perturb-seq_workflow.jpeg) from Wikimedia Commons
Συγγραφέας : Milos Pawlowski
Σχόλια
Δημοσίευση σχολίου